Принципът на работа на пастьоровата пипета се основава основно на гравитационен-поток и капилярно действие, комбинирани с ръчно управление на диференциалите на въздушното налягане за улесняване на аспирацията и преноса на течности.
Ръчен контрол на засмукването: Операторът прилага засмукване към широкия край на пипетата-или орално, или с помощта на спомагателна гумена крушка-, за да създаде отрицателно налягане в тръбата, като по този начин изтегля течност във финия връх.
Гравитационно{0}}разпределяне: След като засмукването се освободи, течността изтича естествено под въздействието на гравитацията; дозирането може да бъде подпомогнато и чрез леко притискане на тялото на пипетата или накланяне на приемащия съд.
Възпроизводимост на капките: Чрез калибриране на съотношението "капки на милилитър", пипетата позволява приблизителен количествен трансфер, което я прави подходяща за процедури, които изискват повторяемост, а не абсолютна прецизност.
Гарантиране на стерилност: Преди употреба може да се постави памучна тапа в широкия край и да се стерилизира, за да се предотврати микробно замърсяване по време на работа-практика, особено често срещана при микробиологичните експерименти.